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HPLC x UHPLC: Como evitar erros de aplicação

UHPLC não é HPLC!

Pode ser que na migração de HPLC para UHPLC ocorram alguns erros de aplicação por não se conhecer bem as diferenças entre eles.

Mas, o que faz um sistema de UHPLC tão especial? Mostramos a seguir vantagens, desafios e dicas sobre o UHPLC, confira:

Vantagens

  • Análise rápida;
  • Alto rendimento;
  • Maior resolução;
  • Aguenta alta pressão.

Desafios

  • Menor volume morto;
  • Detector de rápida varredura;
  • Rápida amostragem automática;
  • Forno (recomendável!);
  • Cuida de seu sistema mais rápido.

O quão rápido é o seu detector?

HPLC rápido significa picos estreitos.

UHPLC - picos mais estreitos

Desafios para o meu amostrador automático?

  • Tempos de ciclos curtos e de alto rendimento;
  • Válvulas de injeção lentas causando picos de pressão;
  • Válvula de alta pressão especial necessária.
    Comparativo gráfico HPLC x UHPLC

Seu ambiente é bem climatizado?

O UHPLC precisa de um ambiente climatizado com temperatura adequada para operar bem, sua alta velocidade gera altas temperaturas,

  • Métodos rápidos precisam de condições controladas;
  • Contrapressões elevadas causam gradientes de temperatura em colunas UHPLC;
  • Desafio de gradientes de temperaturas programadas.

Quais colunas são adequadas?

  • Qualquer coluna de HPLC clássica é adequada num sistema UHPLC, mas para tirar o melhor proveito do seu sistema UHPLC, use colunas de UHPLC com sub 2 µm ou material core shell.
  • Número típico de pratos teóricos:
    UHPLC - número típico de pratos teóricos
  • Otimiza o seu volume morto, não há volumes mortos extras
  • Cuida de suas conexões

Dimensões da coluna recomendadas:
Comprimento: 30 mm até 150 mm
ID: 2 mm até 3 mm


E sobre eluentes?

  • Só use solventes para HPLC de elevada pureza, grau UHPLC (Novo!), grau LCMS
  • Use filtros de eluentes feitos de aço inoxidável
  • Sempre que você usar um tampão: filtre-o!

Confira mais essas dicas ao usar o seu UHPLC

  • Remova pré-colunas / use pré-colunas especiais de UHPLC
  • Use filtro, mas com pequeno volume morto
  • Evite volumes mortos suplementares, por exemplo, coluna, células de fluxo, acessórios…
  • Somente solventes frescos de alta pureza
  • Filtração dos solventes e, especialmente, tampões
  • Filtros de eluentes de aço inoxidável (1µm)
  • Caso especial: Core Shell
  • Volume da coluna é de cerca de 10 a 15% menor com uma coluna core Shell
  • Redução de equilíbrio e tempo de passo gradiente
  • Cuidado! Tenha compromisso entre a resolução e o sistema de segurança
  • Colunas de UHPLC têm filtros com pequenos poros e fica bloqueado facilmente
  • Capacidade de carga reduzida precisa de pequenos volumes de injeção

Gostou das dicas? Compartilhe conosco suas experiências com UHPLC também!


Você usa HPLC?
Então não perca esse guia de resolução de problemas.
A ferramenta que faltava em sua bancada 😉

 

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