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A bomba de HPLC

A bomba de HPLC deve fornecer um fluxo constante de solvente para a coluna em uma ampla gama de condições. As bombas de HPLC da KNAUER incorporam design de pistão duplo. Os problemas do sistema de bombeamento geralmente são fáceis de se detectar e corrigir. Alguns dos sintomas mais comuns são variação nos tempos de retenção, linhas de base com ruído ou aparecimento de picos (spikes) no cromatograma.

Vazamentos na bomba

Vazamentos nas conexões ou selos da bomba resultarão em uma cromatografia de baixa qualidade. Um sinal que aponta um vazamento certo é uma formação de sais em uma conexão da bomba. Os sais da solução tampão devem ser lavados diariamente do sistema com água fresca deionizada. Deixe o sistema de HPLC rodando continuamente em fluxo baixo (por exemplo, 0,1 ml/min) para evitar efeitos de cristalização. Para isolar e reparar problemas específicos relacionados ao seu sistema de HPLC, use as seções de solução de problemas e manutenção do manual de operação do equipamento. Os selos da bomba requerem substituição periódica. Você deve realizar manutenção preventiva periódica ao invés de esperar que ocorra um problema.

Check-valves

Outros locais na bomba onde os problemas geralmente ocorrem são as válvulas de retenção (check-valves) no cabeçote da bomba. Você identifica isso, por exemplo, quando a bomba não consegue manter um fluxo ou pressão constante. Se isso acontecer, limpe as válvulas de retenção com isopropanol, por exemplo. Se isso não funcionar, desmonte as válvulas de retenção e limpe-as em um banho de ultrassom usando isopropanol, por exemplo. Em seguida, reinstale as válvulas de retenção no cabeçote da bomba. Certifique-se de que as válvulas estão na direção certa. Se isso não funcionar, substitua as válvulas de retenção.

Condições severas de uso

Fases móveis que possuem sais em alta concentração ou têm o pH muito alto podem reduzir a eficiência da vedação da bomba. Em alguns casos, o uso prolongado de reagentes de pareamento iônico tem um efeito lubrificante nos pistões da bomba que podem produzir pequenos vazamentos nos anéis de vedação. Alguns selos não funcionam bem com determinados solventes. Antes de usar uma bomba em condições severas, leia as especificações do fabricante do instrumento. Para substituir os selos de vedação, consulte a seção de manutenção do manual da bomba.

O injetor HPLC

O injetor introduz rapidamente a amostra no sistema com uma ruptura mínima do fluxo de solvente. Os sistemas HPLC atualmente usam injetores de tubo de carregamento da amostra (loop) variável, tubo de carregamento da amostra fixo e tipo seringa.

Problemas mecânicos

Problemas mecânicos envolvendo o injetor (por exemplo, vazamentos, capilares, selos desgastados) são fáceis de se detectar e corrigir. Use um filtro de linha no sistema para evitar a obstrução do frit da coluna devido à degradação física do selo do injetor.

Compatibilidade entre solventes no sistema

Alturas de pico variáveis, picos divididos e picos largos podem ser causados ​​por tubo de carregamento da amostra não completamente preenchidos, incompatibilidade da solução de limpeza do injetor com a fase móvel ou baixa solubilidade da amostra. Sempre que possível, dissolva e injete amostras na própria fase móvel. Caso contrário, certifique-se de que o solvente de injeção tenha uma força de eluição menor do que a fase móvel. Esteja ciente de que alguns amostradores automáticos usam soluções separadas de lavagem de seringas. Certifique-se de que a solução de lavagem é compatível e mais fraca do que a fase móvel. Isto é especialmente importante quando se alterna entre análises de fase reversa e normal.

O detector HPLC

Vários tipos de detectores estão disponíveis para sistemas de cromatografia líquida. Os mais comuns são os espectrofotômetros ultravioleta de comprimento de onda fixos ou variáveis, o detector de índice de refração e os detectores de condutividade. Os detectores eletroquímicos e de fluorescência são menos utilizados porque são mais seletivos. Os problemas do detector dividem-se em duas categorias: elétrica e mecânica ou óptica. Para problemas elétricos, você deve entrar em contato com o fabricante do instrumento. Os problemas mecânicos ou ópticos geralmente podem ser rastreados até a célula de fluxo. Os problemas relacionados ao detector incluem vazamentos, bolhas de ar e contaminação da célula. Eles geralmente produzem picos, ruídos ou desvios na linha de base ou baixa sensibilidade. Algumas células – especialmente aquelas usadas em detectores de índice de refração – são sensíveis à pressão. As vazões ou as pressões de trabalho que excedem a recomendação do fabricante poderão quebrar a janela da célula. As lâmpadas velhas ou defeituosas, bem como os incorretos aumentos de tempo, ganho ou atenuação do detector irão reduzir a sensibilidade e a altura do pico. Conexões de cabo defeituosas ou invertidas também podem ser a fonte de problemas.

Confira também os posts detalhados que estamos fazendo dos outros problemas do guia em nosso blog nesse link.